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dc.contributor.authorAlva Avilés, Alma Yolanda
dc.contributor.authorPastelín Palacios, Rodolfo
dc.contributor.authorEscalante Lozada, José Adelfo
dc.contributor.authorAviña Palacios, Zaira
dc.contributor.authorGiles Gómez, Martha
dc.date.issued2016
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11191/8553
dc.description.abstractLa electrotransformación bacteriana es una metodología básica para la obtención de microorganismos recombinantes. En este trabajo se determinaron las condiciones óptimas para electrotransformar cepas de E. coli (W3110 y TOP10) con dos plásmidos con el gen gfp y con resistencia a carbenicilina o kanamicina. El mejor rendimiento se obtuvo con la cepa E. coli TOP10 y las mejores condiciones al obtener una DO600 nm, de 0.9 para ambos plásmidos (92x10⁵ y 41x10⁶ UFC/mL•μg plásmido, respectivamente) incubando a 37 °C/300 rpm/2.5-3 h y electroporar a 1.8 kV/5 mseg. Se desarrollaron colonias verde fluorescentes en agar LB en presencia del antibiótico y bacilos cortos verde fluorescentes por microscopía de fluorescencia. Así mismo, mantuvieron la identidad original a comparar la secuencia del gen ribosomal 16S en la base de datos del GenBank y su fenotipo en pruebas IMViC y con sistemas miniaturizados comerciales (API20E y Vitek). Con los resultados obtenidos se concluyó que la electrotransformación de las cepas fue posible y se logró que éstas presentaran fenotipos adicionales sin perder su identidad a nivel de género y especie.
dc.description.abstractElectroporation is a basic methodology for obtaining recombinant strains. In this work were determinated the optimal conditions for the electrotransformation of E. coli wildtype strains (W3110 and TOP10) with two different plasmids, which encodes for the gfp gene and carbenicillin or kanamycin resistance. Best transformation efficiency were achieved for E. coli TOP10 strain, best conditions were stablished at OD600nm of 0.9 for both plasmids (92x10⁵ and 41x10⁶ CFU/mL•μg plasmid, respectively) at 37 °C/300 rpm/2.5-3 h and 1.8 kV/5 mseg. Fluorescent green colonies growth in media with antibiotic, and fluorescent green bacilli were observed by fluorescence microscopy. Nevertheless, the strains maintain its genotypic and phenotypic characteristics based on 16S ribosomal gen sequences compared on GenBank database and on IMViC tests and commercial miniaturized identification systems (API20E and Vitek). It was concluded that the electrotransformation process in this strains was achieved and each one of it could have additional phenotypes without loose its identity at species level.
dc.formatpdf
dc.language.isospa
dc.publisherUniversidad Autónoma Metropolitana (México). Unidad Azcapotzalco. División de Ciencias Básicas e Ingeniería.
dc.sourceRevista Tendencias en Docencia e Investigación en Química. Año 2, número 2 (enero-diciembre de 2016). ISSN: 2448-6663
dc.subjectElectrotransformación, E. coli, gfp apR. Electrotransformation.
dc.subject.classificationBIOLOGÍA Y QUÍMICA::CIENCIAS DE LA VIDA::MICROBIOLOGÍA::METABOLISMO BACTERIANO
dc.titleElectrotransformación del gen gfp en E. coli W3110
dc.typeArtículo


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